Lajme

Javascript është aktualisht i çaktivizuar në shfletuesin tuaj.Disa veçori të kësaj faqe interneti nuk do të funksionojnë nëse JavaScript është i çaktivizuar.
Regjistrohuni me detajet tuaja specifike dhe ilaçin specifik me interes, dhe ne do t'i përputhim informacionet që jepni me artikujt në bazën tonë të të dhënave të gjerë dhe do t'ju dërgojmë menjëherë një kopje PDF.
Ding Jingnuo, Zhao Weifeng, Departamenti i Sëmundjeve Infektive, Spitali i Parë i lidhur me Universitetin Suzhou, Qyteti Suzhou, Provinca Jiangsu, 215000 Tel.tumoret e sistemit tretës me një mbijetesë të përgjithshme 5-vjeçare prej 14,1%.Shumë pacientë me HCC diagnostikohen në një fazë të avancuar, kështu që shqyrtimi i hershëm është thelbësor për të reduktuar vdekshmërinë nga HCC.Përveç treguesve të zbulimit të përdorur zakonisht si alfa-fetoproteina e serumit (AFP), alfa-fetoproteina reaktive ndaj lenteve lektinore (AFP-L3) dhe protrombinës jonormale (proteina II e induktuar nga mungesa e vitaminës K, PIVKA-II), teknikat e biopsisë së lëngjeve Është treguar të jetë me vlerë diagnostike në zbulimin e HCC.Krahasuar me procedurat invazive, biopsia e lëngjeve mund të zbulojë metabolitët malinj qarkullues.Teknikat e biopsisë së lëngshme zbulojnë qelizat qarkulluese të tumorit, ADN-në qarkulluese të tumorit, ARN-në qarkulluese dhe ekzosomet dhe përdoren për shqyrtimin e hershëm, diagnostikimin dhe vlerësimin prognostik të HCC.Ky artikull shqyrton biologjinë molekulare dhe aplikimin e teknikave të ndryshme të biopsisë së lëngjeve për të izoluar biomarkerët premtues që mund të jenë opsione të zbatueshme për vlerësimin e hershëm të HCC për të përmirësuar shqyrtimin e hershëm të grupeve të HCC me rrezik të lartë.Fjalë kyçe: teknikë e biopsisë së lëngjeve, karcinoma hepatoqelizore, grup me rrezik të lartë.
Karcinoma hepatocelulare (HCC) është një tumor malinj i zakonshëm i traktit digjestiv, duke u renditur i gjashti në mesin e rasteve të reja të tumoreve malinje si tek meshkujt ashtu edhe tek femrat.1 Në mbarë botën, kanceri i mëlçisë është shkaku i tretë kryesor i vdekjeve nga kanceri pas kancerit të mushkërive dhe kolorektalit, duke përbërë 8.3% të vdekjeve të lidhura me kancerin nga të gjitha neoplazmat malinje.1 Prognoza e HCC është e lidhur ngushtë me stadin në diagnozë.Arsyet kryesore për mbijetesë të dobët në HCC janë metastazat intrahepatike, trombet e tumorit venoz portal dhe metastazat e largëta që përjashtojnë rezeksionin dhe shumë nga këto karakteristika janë tashmë të pranishme te pacientët në momentin e diagnozës.
Bazuar në udhëzimet diagnostikuese dhe të trajtimit, faktorët kryesorë të rrezikut për zhvillimin e HCC janë cirroza e mëlçisë, virusi kronik i hepatitit B (HBV) ose infeksioni i virusit të hepatitit C (HCV), sëmundja e mëlçisë yndyrore alkoolike dhe sëmundja e mëlçisë yndyrore joalkoolike (NAFLD). ).2 Përveç kësaj, faktorët e rrezikut për HCC përfshijnë marrjen e ushqimit të kontaminuar me aflatoksinë, skistozomiazën, shkaqe të tjera të cirrozës, një histori familjare të kancerit të mëlçisë, diabetit, obezitetit, pirjes së duhanit dhe dëmtimit të mëlçisë të shkaktuar nga ilaçet.Grupet me rrezik të lartë 35 dhe 45 vjeç duhet të bëjnë kontrolle të rregullta mjekësore.Ekzaminimi i hershëm është një strategji e rëndësishme e trajtimit të hershëm për të përmirësuar mbijetesën e përgjithshme të pacientëve me HCC.
Biomarkerët si AFP, AFP-L3 dhe PIVKA-II rekomandohen për shqyrtimin e hershëm të HCC3,4.Teknikat e biopsisë së lëngshme kanë treguar rezultate premtuese në diagnostikimin e hershëm dhe vlerësimin e trajtimit.5,6 Është bërë përparim i rëndësishëm në biopsinë e lëngshme të HCC, e cila mund të ketë ndjeshmëri dhe specifikë më të lartë se shënuesit e serumit të përdorur zakonisht si AFP (Tabela 1).
AFP është një biomarker i përdorur gjerësisht në HCC dhe aktualisht është biomarkeri më i detajuar që përdoret gjerësisht për shqyrtimin, diagnostikimin dhe vlerësimin e hershëm të sëmundjes.Një nivel i ngritur vazhdimisht i AFP konsiderohet një faktor rreziku për përparimin e HCC.7,8 Shkalla e zbulimit të karcinomës së vogël hepatoqelizore (sHCC) po rritet me zhvillimin e ultrazërit dhe tomografisë së kompjuterizuar, dhe AFP është gjetur të jetë veçanërisht e pandjeshme ndaj zbulimit të hHCC në praktikën klinike.Sipas një studimi retrospektiv shumëqendror9, AFP pozitive u gjet në 46% (616/1338) të rasteve të HCC dhe 23.4% (150/641) të rasteve sHCC.Përveç kësaj, nivelet e AFP janë të ngritura në pacientët me sëmundje kronike të mëlçisë dhe cirrozë.10 Kështu, AFP ka një efekt të kufizuar shqyrtimi për sHCC.11 Sipas Udhëzimeve të Praktikës Klinike të Azi-Paqësorit për Karcinomën Hepatocelulare, përdorimi i AFP nuk rekomandohet.12 Provat klinike sugjerojnë se PIVKA-II është superior ndaj AFP në trajtimin e HCC dhe se kombinimi i PIVKA-II dhe AFP ka një vlerë më të lartë diagnostike në HCC.13 Krahasuar me biopsinë e indeve, biopsia e lëngjeve zbulon kryesisht metabolitët e lidhur me tumorin në lëngjet e trupit (gjak, pështymë, lëngun pleural, lëngun cerebrospinal ose urinë) dhe është më pak invazive ndaj indeve.14 Për më tepër, biopsitë e lëngshme mund të pasqyrojnë tipare malinje që nuk janë të pranishme në indet e tumorit primar.15 Biopsi të lëngshme nuk po testohen ende në praktikën klinike për të gjitha llojet e tumoreve, por potenciali i tyre diagnostikues në kancer po tërheq vëmendjen e onkologëve.16 Biopsia e lëngshme mund të zbulojë qelizat e tumorit qarkullues (CTCs), ADN-në qarkulluese të tumorit (cDNA), ARN-në e lirë qarkulluese (ecRNA) dhe ekzosome.Në këtë artikull, ne do të diskutojmë karakteristikat, rolin dhe aplikimin e teknikave të ndryshme të biopsisë së lëngjeve në shqyrtimin e hershëm të grupeve me HCC me rrezik të lartë.
ADN-ja jashtëqelizore (cfDNA) në mostrat e gjakut nga individë të shëndetshëm u përshkrua për herë të parë në 1948 nga Mandel et al.17 cfDNA është një fragment ADN-je pa qeliza afërsisht 160-180 bp në gjatësi, me origjinë kryesisht nga limfocitet dhe qelizat mieloide.ctDNA është një fragment specifik i ADN-së mutant i lëshuar nga qelizat e tumorit në gjakun periferik, i cili përfaqëson informacionin gjenomik të qelizave tumorale pas disa proceseve patofiziologjike, duke përfshirë nekrozën, apoptozën dhe ekskretimin.Përqindja e ctDNA në cfDNA totale ndryshon gjerësisht me llojin e tumorit dhe fragmentet e cDNA raportohet të jenë zakonisht më pak se 167 bp në gjatësi.18 Studimi i Underhill tregoi se fragmentet e cfDNA janë përgjithësisht më të shkurtra se cfDNA normale.19 Krahasuar me individët e shëndetshëm, gjatësia totale e fragmenteve të cfDNA në gjakun e pacientëve me kancer është më e shkurtër, kështu që cfDNA mund të përdoret si një tregues i shqyrtimit të hershëm të tumorit.Pasurimi i disa nëngrupeve të gjatësisë së fragmenteve të cfDNA-së mund të përmirësojë zbulimin e cDNA-së të lidhur me tumoret e ngurtë jo metastatikë.Studimet kanë treguar se ctDNA gjendet në mbi 75% të kancereve të avancuara të pankreasit, zorrës së trashë, fshikëzës, gastrointestinit, mëlçisë, vezoreve, gjirit, melanomës dhe kancerit të kokës dhe qafës.20,21 Megjithatë, sasia e ctDNA në gjak varet nga vendndodhja e tumorit.22 Në një studim nga Bettegoud, pacientët me kancer kolorektal, gji, mëlçi, mushkëri dhe prostatë u zbuluan se kishin nivele më të larta të cDNA në gjakun e tyre sesa kanceret e tjerë.Në të kundërt, në pacientët me kancer oral, kancer pankreatik, kancer gastrik dhe glioma, përqendrimi i cDNA në gjak ishte më i ulët.njezet e nje
Për shkak se ctDNA përmban të njëjtat mutacione gjenetike si qelizat e tumorit primare, cDNA mund të përdoret për të zbuluar mutacionet heterogjene specifike të tumorit dhe ndryshimet epigjenetike, duke përfshirë metilimin, hidroksimetilimin, variacionet e vetme nukleotide dhe variacionet e numrit të kopjeve.njëzet e tre
Metilimi i ADN-së është një nga ndryshimet më të zakonshme epigjenetike që rezulton në shtypjen e gjeneve.Krahasuar me qelizat normale, ka dallime në nivelin e përgjithshëm të metilimit të gjenomës së qelizave tumorale, veçanërisht në metilimin e gjeneve shtypëse të tumorit, të cilat mund të zbulohen në një fazë të hershme, duke sugjeruar se ndryshimet në metilimin e ADN-së mund të jenë një tregues i hershëm zbulimi i tumorigjenezës.Gjenet shtypës të tumorit të lidhur me HCC mund të çaktivizohen nga metilimi promotor, duke stimuluar kështu tumorigjenezën.24 Metilimi i ADN-së është një shënues ideal për diagnostikimin e hershëm të tumoreve për shkak të specifikës së indeve, zbulueshmërisë dhe pavarësisë së moshës.Përveç kësaj, metilimi i ADN-së është më i zakonshëm në krahasim me mutacionet somatike, sepse ka më shumë rajone të synuara dhe disa vende të ndryshuara të CpG në secilin rajon të gjenomit të synuar.25 Përveç vendeve të shumta të CpG, një numër i madh lokacionesh të pavarura të hipermetiluara në ctDNA janë identifikuar në DBX2, THY1, MT1M, INK4A, VIM, FBLN1 dhe RGS10.26 Xu et al.Krahasimi i mostrave të cfDNA nga 1098 pacientë me HCC dhe 835 kontrolle të shëndetshme, ku gjenet e lidhura me HCC u zbuluan se lidhen fort me nënshkrimet korresponduese të metilimit të cDNA të plazmës.25 Bazuar në analizat laboratorike, u zhvillua një model parashikues që përmban 10 shënues metilimi me ndjeshmëri dhe specifikë përkatësisht 85.7% dhe 94.3%, dhe këta shënues ishin shumë të lidhur me masën e tumorit, fazën e tumorit dhe përgjigjen ndaj trajtimit.Këto rezultate tregojnë se përdorimi i shënuesve të metilimit të cDNA premton shumë në diagnostikimin, monitorimin dhe prognozën e HCC.Në një model metilimi të përbërë nga tre gjene të metiluar në mënyrë të gabuar (APC, COX2, RASSF1A) dhe një miRNA (miR203) të paraqitur nga Lu et al27, ndjeshmëria dhe specifika e modelit 27 për diagnostikimin e HCC të lidhur me HBV ishin të krahasueshme.80%.Përveç kësaj, modeli mund të zbulojë 75% të pacientëve të padiagnostikuar HCC me një nivel AFP prej 20 ng/mL.Gjeni për proteinën 1A të familjes së domenit të lidhur me Ras (RASSF1A) është sekuenca kryesore e përsëritur e ADN-së në gjenomin e njeriut.Araujo etj.arriti në përfundimin se hipermetilimi i promotorit RASSF1A mund të jetë një biomarker i vlefshëm për shqyrtimin e hershëm të HCC dhe një objektiv potencial molekular për terapinë epigjenetike.28 Në një studim, hipermetilimi i promotorit të serumit RASSF1A u gjet në 73.3% të pacientëve me HCC.29 Elementi nukleotid 1 i ndërthurur gjatë (LINE-1) është një tjetër ndërmjetës retrotranspozues shumë aktiv.Hipometilimi i LINE-1 u gjet në ADN-në e 66.7% të mostrave të serumit HCC dhe u shoqërua me përsëritjen e hershme dhe mbijetesën e dobët pas rezeksionit radikal.29 Hipermetilimi është një proces i zakonshëm gjenetik që luan një rol unik në zhvillimin e cirrozës së mëlçisë dhe HCC.30 Në të kundërt, hidroksimetilimi është një proces demetilimi që nxit riaktivizimin dhe shprehjen e gjenit, dhe zbulimi i produktit 5-hidroksimetilcitozinë (5-hmC) në këtë proces mund të përdoret për të identifikuar një tumor.Metilimi dhe hidroksimetilimi i cDNA janë të lidhur me tumorigjenezën dhe mund të kontribuojnë në shqyrtimin e hershëm të HCC.Në një studim me 2554 subjekte, 31 5-hmC të gjenomit u gjetën në mostrat e cfDNA dhe 32 gjene u identifikuan duke krahasuar sekuencat 5-hmC në pacientët me HCC dhe grupet me rrezik të lartë si ata me sëmundje kronike.Modelet diagnostike të sëmundjeve të mëlçisë.dhe cirroza.Ky model ishte superior ndaj AFP në dallimin e HCC nga indet jo tumorale.
Mutacionet në rajonet koduese mund të çojnë në anomali transkriptuese, të cilat mund të çojnë në ndryshime në sekuencat e proteinave dhe në fund të fundit kancer.Variantet e vetme nukleotide janë shënues gjenomik të rëndësishëm për shqyrtimin e hershëm të tumorit për shkak të besueshmërisë së tyre të lartë të indeve dhe specifikave të larta të tumorit dhe indeve.Studime të shumta të lidhura me HCC duke përdorur sekuencën e gjeneratës së ardhshme (NGS) për sekuencën e ekzomit dhe të gjithë gjenomit të kancerit kanë identifikuar gjene të zakonshme qelizore të mutuara si TP53 dhe CTNNB1, si dhe disa duke përfshirë ARID1A, MLL, IRF2.Gjenet e reja, ATM, CDKN2A, FGF19, PIK3CA, RPS6KA3 dhe JAK1 tregojnë shkallë të moderuar të mutacionit. Analiza e funksionit të gjenit mutant sugjeron se ndryshimet në rimodelimin e kromatinës, transduksionin e sinjalit Wnt/β-catenin dhe JAK/STAT, shtegun e ciklit të qelizave P53, modifikuesit epigjenetikë, rrugët e stresit oksidativ, shtegun PI3K/AKT/MTOR dhe RAS/RAF/ Rruga e kinazës MAPK luan një rol vendimtar në onkogjenezën e HCC.32,33 Në një studim në të cilin u zbuluan mutacione të lidhura me tumorin, Huang et al zbuluan se frekuenca e mutacioneve të lidhura me tumorin e varur nga ctDNA ishte 19.5%, dhe specifika ishte 90%. .34 Përveç kësaj, pacientët që përjetuan invazion vaskular kishin më shumë gjasa të kishin mutacione të ctDNA (P=0.041) dhe mbijetesë më të shkurtër pa përsëritje (P<0.001). Analiza e funksionit të gjenit mutant sugjeron se ndryshimet në rimodelimin e kromatinës, transduksionin e sinjalit Wnt/β-catenin dhe JAK/STAT, shtegun e ciklit të qelizave P53, modifikuesit epigjenetikë, rrugët e stresit oksidativ, shtegun PI3K/AKT/MTOR dhe RAS/RAF/ Rruga e kinazës MAPK luan një rol vendimtar në onkogjenezën e HCC.32,33 Në një studim në të cilin u zbuluan mutacione të lidhura me tumorin, Huang et al zbuluan se frekuenca e mutacioneve të lidhura me tumorin e varur nga ctDNA ishte 19.5%, dhe specifika ishte 90%. .34 Përveç kësaj, pacientët që përjetuan invazion vaskular kishin më shumë gjasa të kishin mutacione të ctDNA (P=0.041) dhe mbijetesë më të shkurtër pa përsëritje (P<0.001).Analiza e funksionit të gjenit mutant sugjeron që ndryshimet në rimodelimin e kromatinës, sinjalizimin Wnt/β-catenin dhe JAK/STAT, shtegun e ciklit qelizor P53, modifikuesit epigjenetikë, rrugët e stresit oksidativ, shtegun PI3K/AKT/MTOR dhe rrugët e kinazës RAS/RAF/MAPK një rol kritik në tumorigjenezën HCC.32,33 Në një studim që gjeti mutacione të lidhura me tumorin, Huang et al.zbuloi se frekuenca e mutacioneve të lidhura me tumorin e varur nga ctDNA ishte 19.5% dhe specifika ishte 90%..34 Krome того, во пациентов со сосудистой инвазией чаще встречались мутации цДНК (P=0,041) dhe lëndimi i parezidencës vыzhivaemostь (P<0,001). .34 Përveç kësaj, pacientët me invazion vaskular kishin më shumë mutacione të cDNA (P=0.041) dhe një mbijetesë më të shkurtër pa sëmundje (P<0.001).Analiza funksionale e gjeneve mutant zbuloi rimodelimin e kromatinës, sinjalizimin Wnt/β-catenin dhe JAK/STAT, rrugën e ciklit qelizor P53, modifikuesit epigjenetikë, rrugën e stresit oksidativ, rrugën PI3K/AKT/MTOR dhe RAS/RAF/MAPK Rruga e kinazës luan një rol kritik në onkogjenezën e HCC. 32,33 在一项检测到肿瘤相关突变的研究中，Huang 等人发现肿瘤相关突变依赖于ctDNA 的频率为19.5%，特异性为90% .34 此外，经历血管侵犯的患者更有可能发生ctDNA突变（P=0,041）和更短的无复发生存期（P<0,001）。 32.33 在 一 项 检测 到 相关 突变 的 研究 ， huang 等 肿瘤 相关 突变 突变 依赖于 ctdna 的 为 为 为 19.5% ， 特异性 为 为 为 为 和 此外 经历 血管 侵犯 的 更 可能 发生 发生 突变 突变 （p = 0.041） 和 更 更 更.短的无复发生存期（P<0,001）.32,33 Në një studim që gjeti mutacione të lidhura me tumorin, Huang et al.zbuloi se mutacionet e lidhura me tumorin ishin 19.5% të varura nga cDNA me një specifikë prej 90% 34. Përveç kësaj, pacientët që kishin pësuar invazionin vaskular kishin më shumë gjasa të zhvillonin cDNA.мутация (P = 0,041) dhe более короткая безрецидивная выживаемость (P <0,001). mutacion (P=0.041) dhe mbijetesë më e shkurtër pa sëmundje (P<0.001).Një tjetër gjen i zakonshëm drejtues i HCC është TP53, i cili ka një shkallë mutacioni mbi 30%.Studimet kanë treguar se frekuenca e mutacioneve të TP53 në ctDNA në gjak dhe urinë varion nga 5% në 60%.35 Studimi i Johan tregoi se spektri i mutacionit të ctDNA në HCC të vonë ka një shkallë të ngjashme mutacioni me HCC të hershëm, duke përfshirë promotorin TERT (51%), TP53 (32%), CTNNB1 (17%), PTEN (8%), mutacione në AXIN1 ., ARID2, KMT2D dhe TSC2 (6% secila).36 Onkogjeni β-catenin (CTNNB1) luan një rol të rëndësishëm në rrugën e sinjalizimit Wnt.Koaktivizuesi i transkriptimit CTNNB1 mund të nxisë shprehjen e gjeneve, e cila mund të çojë në përhapjen e qelizave, frenimin e apoptozës dhe angiogjenezën.CTNNB1 gjithashtu mund të ndërveprojë me TERT për të nxitur transformimin e hepatociteve.33 Promotori TERT shpesh mutohet në disa tumore të ngurta.Ndryshimet në TERT, një nga ndryshimet gjenetike më të hershme në transformimin malinj të HCC, mund të çojnë në riaktivizimin e telomerazës në hepatocitet cirrotike dhe mund të nxisin përhapjen dhe parandalimin e plakjes.Mutacionet në promotorin 33-37 TERT janë raportuar të ndodhin në 59-90% të pacientëve me nyje proliferative të mëlçisë dhe HCC të hershme dhe janë të lidhura me mbijetesën.38
Ndryshimet e numrit të kopjeve (CNA) janë një nënlloj i rëndësishëm i mutacioneve somatike.Hulumtimet kanë treguar se barra e përhapur dhe fokale e CNA është një nënshkrim gjenomik i aftë për të parashikuar infiltrimin imunitar të tumorit dhe përjashtimin në disa lloje kanceri.39 Sinjalizimi aktiv i infiltrimit, aktiviteti i lartë citolitik, inflamacioni i rëndë dhe shënuesit gjenetikë të lidhur me paraqitjen e antigjenit në HCC.Analiza e grupit të të dhënave të polimorfizmave të vetme nukleotide në 477 subjekte zbuloi një ngarkesë të ulët në SNQ.Në të kundërt, tumoret kromozomakisht të paqëndrueshëm me një ngarkesë të lartë të gjerë CNA treguan shenja të refuzimit imunitar dhe u shoqëruan me përhapjen, riparimin e ADN-së dhe mosfunksionimin e TP53.Xu et al.tregoi se grupi HCC kishte rezultate më të larta të CNA se grupi i sëmundjes kronike të mëlçisë.40 Duke përdorur sekuencën e plotë të gjenomit të një qelize të vetme, CNA-të u zbuluan se shfaqen herët në hepatokarcinogjenezën dhe mbeten relativisht të qëndrueshme gjatë përparimit të tumorit.41 Chung et al.zbuloi se nivelet e cfDNA ishin të ngritura ndjeshëm në pacientët me HCC dhe se CNA të gjenomit në cfDNA ishin një shënues i rëndësishëm prognostik i pavarur në pacientët me HCC të trajtuar me sorafenib.42 Pacientët me një ngarkesë më të lartë të CNA kishin më shumë gjasa të kishin përparim të sëmundjes dhe vdekje sesa ata me një ngarkesë më të ulët të CNA.Ollerich etj.zbuloi se indeksi i paqëndrueshmërisë së numrit të kopjeve (CNI) mund të përdoret për të vlerësuar CNA në cfDNA të pacientëve me kancer.Ata vunë në dukje se pacientët me kancer të avancuar kishin rezultate dukshëm më të larta CNI sesa një grup kontrolli, i cili vlerëson përgjigjen e pacientit ndaj kimioterapisë sistemike dhe imunoterapisë.43 Këto rezultate sugjerojnë se CNA-të e gjetura në ekzemplarët e biopsisë së lëngshme mund të shërbejnë si tregues prognostik në pacientët me kancer të avancuar.HCC në sfondin e terapisë sistemike.
Aktualisht, metodat e përdorura për të zbuluar ctDNA mund të ndahen në metoda të synuara dhe jo të synuara.Shkurtimisht, metodat e synuara si reaksioni zinxhir i polimerazës dixhitale (dPCR), BEAMing digital PCR, Amplification Refractory Mutation System-PCR, Capp-Seq dhe Tam-Seq janë shumë të ndjeshme ndaj gjeneve të paracaktuara.Metodat jashtë objektivit të tilla si sekuenca e të gjithë gjenomit dhe NGS ofrojnë një pamje gjithëpërfshirëse të të gjithë peizazhit gjenomik.44 Krahasuar me panelet e synuara, sekuenca e të gjithë gjenomit mund të zbulojë jo vetëm mutacionet dhe futjet e pikave, por edhe rirregullimet dhe variacionet e numrit të kopjeve.prognoza, dhe CTC dhe cfDNA janë tregues të mirë që mund të përdoren për monitorimin dinamik të HCC.45 Përveç kësaj, analiza cfDNA mund të jetë më e dobishme në zbulimin e HCC.Yan et al.tregoi se cfDNA në plazmën e pacientëve me HCC ishte dukshëm më e lartë se në pacientët me fibrozë të mëlçisë dhe kontrollet e shëndetshme.Krahasuar me AFP, ctDNA pritet të jetë një shënues më i mirë i shqyrtimit për HCC të hershëm.46 Në një studim prospektiv të 47 biopsive të lëngshme që testuan cfDNA dhe proteina në një popullatë popullsie, ato u treguan efektive në diferencimin e pacientëve me HCC nga pacientët pa HCC.Në një ndjekje të 331 pacientëve normalë dhe AFP-negativë me ultratinguj, ndjeshmëria dhe specifika e cfDNA për diagnostikimin e HCC ishin përkatësisht 100% dhe 94%, kështu që cDNA mund të zbulonte HCC në individë asimptomatikë seropozitiv të HBsAg.Në studimin Yeo48, një frekuencë e lartë (92.5%) e hipermetilimit të promotorit RASSF1A u gjet në pacientët me HCC.Përveç kësaj, Xu et al.krijoi një model diagnostikues për të parashikuar HCC duke përdorur një panel shënuesish specifikë metilimi me një specifikë dhe ndjeshmëri prej 90.5% dhe 83.3%, respektivisht.Paneli lejon që pacientët me HCC të dallohen nga pacientët me sëmundje të tjera të mëlçisë, gjë që është më e mirë se AFP.Ata zbuluan gjithashtu se kontrollet normale që rezultuan pozitivë mund të kenë faktorë rreziku për HCC, si infeksioni HBV ose një histori e përdorimit të alkoolit.25 Ne supozojmë se faktorët me rrezik të lartë për HCC mund të nxisin hipermetilimin e cfDNA, i cili më pas kontribuon në përparimin e HCC, dhe kështu cfDNA mund të luajë një rol kyç në shqyrtimin për grupet me rrezik të lartë.Cai et al.përmblidhni gamën e plotë të mutacioneve të ctDNA dhe ofroni një strategji të fortë për vlerësimin e ngarkesës së tumorit tek pacientët.49 Kjo strategji mund të identifikojë tumorigjenezën një mesatare prej 4.6 muajsh përpara ndryshimit të imazherisë dhe ka treguar performancë më të lartë diagnostikuese në krahasim me biomarkerët e serumit AFP, AFP-L3 dhe PIVKA-II.Vlera diagnostike e testimit të cDNA është demonstruar kur vlerësimi i imazhit nuk është i disponueshëm, kështu që testimi i cDNA ka vlerë në diagnostikimin e hershëm të HCC në grupet me rrezik të lartë.Kohët e fundit, shkencëtarët përdorën teknologjinë NGS për të analizuar treguesit e variacionit gjenetik me shumë variacione (përfshirë 5-hidroksimetilcitozinë, 5'-motiv, fragmentim, gjurmë nukleozome, HIFI) në 3204 mostra klinike dhe cfDNA.50 modele HIFI të rivlerësuara me tre grupe të pavarura treni, testimi dhe testimi treguan diskriminim të qëndrueshëm dhe të besueshëm midis popullatave HCC dhe jo-HCC me ndjeshmëri 95,79% dhe 95,42% në grupet e testeve dhe testeve specifike për HCC, respektivisht.Sekset ishin përkatësisht 95.00% dhe 97.83%.Vlera diagnostike e metodës HIFI është më e lartë se ajo e AFP në dallimin e HCC nga cirroza.Përveç kësaj, ctDNA përdoret gjithashtu në trajtimin kirurgjik.Atsushi etj.përcaktoi nivelet serike të ctDNA para operacionit në pacientët me HCC dhe zbuloi se shkalla e përsëritjes dhe shkalla e metastazave ekstrahepatike në grupin cDNA pozitiv ishin dukshëm më të larta se në grupin cDNA negative dhe nivelet e cDNA ishin të lidhura ndjeshëm.me progresion të tumorit.51 Duke qenë një biomarker shumë i ndjeshëm, ctDNA mund të parashikojë aftësinë e HCC për të pushtuar enët.Wang et al.u krye sekuenca e të gjithë gjenomit të 46 pacientëve me HCC, dhe analiza multivariate tregoi se vlera e pragut të frekuencës së alelit të variantit të cDNA për pushtimin në mikroenë është 0.83%, ndjeshmëria 89.7% dhe specifika 80.0%.një faktor rreziku i pavarur për pushtimin mikrovaskular në HCC të resektuar, duke sugjeruar që cDNA mund të ndihmojë në drejtimin e trajtimit optimal.Si përfundim, ctDNA është plotësisht e përfshirë në shfaqjen dhe zhvillimin e HCC dhe mund të përdoret për shqyrtimin e hershëm, vlerësimin kirurgjik dhe monitorimin e sëmundjes.
CTC-të janë qeliza malinje që rrjedhin nga tumoret primare ose metastazat që metastazojnë në qarkullimin e gjakut.Qelizat tumorale sekretojnë metaloproteinaza matricore (MMPs), të cilat shpërbëjnë membranën bazale, duke lejuar qelizat e tumorit të hyjnë drejtpërdrejt në gjak dhe enët limfatike.Megjithatë, shumica e CTC-ve eliminohen me shpejtësi nga anoikis, sulmi imunitar ose stresi i prerjes.53 Tranzicioni epitelial-mezenkimal (EMT) lejon që CTC të izolohen lehtësisht nga indi i tumorit primar, të pushtojnë kapilarët dhe të fitojnë mbijetesë të përmirësuar ndjeshëm, metastaza, invazivitet dhe rezistencë ndaj ilaçeve.Studimet kanë treguar se ekziston një heterogjenitet i thellë midis qelizave të ndryshme të tumorit në tumoret metastatike parësore.Kështu, analiza CTC mund të çojë në një kuptim gjithëpërfshirës të heterogjenitetit të qelizave tumorale.54
Markuesit specifikë për CTC-të e lidhura me HCC përfshijnë glypican-3 (GPC3), receptorin azialoglykoprotein (ASGPR), molekulën e ngjitjes së qelizave epiteliale (EpCAM) dhe shënuesit e lidhur me qelizat burimore si CD44, CD90, 55 dhe ngjitjen ndërqelizore (ICAM1).) .56 Markeri GPC3 është një proteinë e ankoruar në membranën qelizore që përdoret klinikisht për analizën patologjike dhe karakterizimin e HCC.57 Shprehja e GPC3 është më e zakonshme në qelizat tumorale HCC me diferencim të ndërmjetëm dhe të ulët dhe nxit migrimin ekstrahepatik;përveç kësaj, prania e GPC3+ CTC tregon HCC metastatike.58 ASGPR është një proteinë transmembranore e shprehur vetëm në sipërfaqen e hepatociteve dhe është shumë e shprehur në HCC të mirë-diferencuar.EpCAM është një nga proteinat më të përdorura të lidhura me membranën për të kapur CTC.EpCAM është identifikuar si një shënues sipërfaqësor i qelizave HCC me karakteristika të qelizave staminale,59 i cili lidhet me karakteristika të ndryshme klinikopatologjike të HCC, të tilla si invazioni vaskular, nivelet e vlerësuara të AFP-së dhe faza e avancuar e kancerit të mëlçisë në Spitalin e Barcelonës (BCLC).Fenotipi 60 CTC EMT është shumë metastatik.54 Proceset EMT në CTC nxisin metastazën e HCC.Shprehja e shënuesve EMT si vimentin, twist, E-box zinc finger lidhja (ZEB) 1, ZEB2, kërmilli, slug dhe E-cadherin janë studiuar në CTC me prejardhje nga mëlçia nga pacientët me HCC.58 Sistemi CanPatrol™ i zhvilluar nga Cheng [61] i klasifikoi CTC-të në tre nëngrupe fenotipike bazuar në shënuesit e shprehur kryesisht: fenotipi epitelial (EpCAM, CK8/18/19), fenotipi mezenkimal (vimentin, mbështjellë) dhe fenotipet e përziera.Në 176 pacientë, CTC totale ishte superiore ndaj AFP në diferencimin e HCC nga sëmundja beninje e mëlçisë.Vlerat AUC për CTC totale, AFP dhe CTC dhe AFP totale të kombinuara ishin 0,774 (95% CI, 0,704–0,834), 0,669 (95% CI, 0,587–0,750) dhe 0,821 (95% CI, 0,704–0,834), dhe 0,821 (95% CI, 6–0,8. ).), respektivisht.Klasifikimi CTC i bazuar në EMT mund të parashikojë diagnozën e HCC, përsëritjen e hershme, metastazat dhe kohën më të shkurtër të përgjithshme.
Aktualisht, metodat për zbulimin e CSC përfshijnë metoda fizike dhe metoda biologjike.Metodat fizike, të referuara shpesh si pasurim bazuar në vetitë biofizike, varen kryesisht nga vetitë fizike të CSC, si madhësia, dendësia, ngarkesa, lëvizshmëria dhe deformueshmëria.Në varësi të vetive fizike, ekzistojnë metoda të ndryshme si sistemet e bazuara në filtrim, dielektroforeza, etj. Kjo e fundit, e njohur edhe si pasurimi i bazuar në imunoaffinitet, bazohet kryesisht në lidhjen antigjen-antitrup pasi metoda përdor antitrupa kundër biomarkuesve specifikë të tumorit. të tilla si EpCAM, ASGPR, receptori i faktorit të rritjes epidermale të njeriut 2 (HER2), antigjeni specifik i prostatës (PSA), pancitokeratina njerëzore (P-CK) dhe karbamoil fosfat sintaza 1 (CPS1).62 Një lloj tjetër, i quajtur metoda pa pasurim, përdor citometrinë e rrjedhës për të diferencuar CTC nga leukocitet bazuar në një raport dhe madhësi më të lartë bërthamore-citoplazmike.Aktualisht, i vetmi test i miratuar nga FDA për zbulimin e CTC-ve është sistemi Cell-Search™, i cili përdor shënuesin e sipërfaqes së qelizave EpCAM. Megjithatë, zbulimi i kombinuar i CTC i bazuar në shënues mund të rrisë shkallën e pozitivitetit.54 Një përzierje e antitrupave kundër ASGPR dhe CPS1 arriti një shkallë zbulimi të CTC prej 91% në pacientët me HCC.63 Zhang et al përdorën një CTC-Chip me antitrupa kundër ASGPR, P. -CK dhe CPS1, dhe diferencoi pacientët HCC nga ata me sëmundje beninje të mëlçisë ose kancer jo-HCC në një shkallë prej 100%.64 Një studim nga Wang zbuloi EpCAM + CTC në 60% të 42 pacientëve HCC dhe gjeti korrelacione të rëndësishme midis të dy pozitivitetit. shkalla dhe numri i CTC me fazën TNM.65 Guo et al zbuluan se një rezultat PCR i rrjedhur nga CTC ishte ngritur në 125/171 (73%) pacientë, niveli i AFP i të cilëve ishte <20 ng/mL me një ndjeshmëri prej 72.5% dhe një specifika prej 95,0%, krahasuar me 57,0% dhe 90,0% për AFP në një kufi prej 20 ng/mL.66 Kombinimi i AFP dhe CTC mund të përmirësojë zbulimin e HCC.45 Besohet se CTC kanë një avantazh ndaj AFP në shqyrtimin e hershëm të grupeve në rrezik të lartë për HCC. Megjithatë, zbulimi i kombinuar i CTC i bazuar në shënues mund të rrisë shkallën e pozitivitetit.54 Një përzierje e antitrupave kundër ASGPR dhe CPS1 arriti një shkallë zbulimi të CTC prej 91% në pacientët me HCC.63 Zhang et al përdorën një CTC-Chip me antitrupa kundër ASGPR, P. -CK dhe CPS1, dhe diferencoi pacientët HCC nga ata me sëmundje beninje të mëlçisë ose kancer jo-HCC në një shkallë prej 100%.64 Një studim nga Wang zbuloi EpCAM + CTC në 60% të 42 pacientëve HCC dhe gjeti korrelacione të rëndësishme midis të dy pozitivitetit. shkalla dhe numri i CTC me fazën TNM.65 Guo et al zbuluan se një rezultat PCR i rrjedhur nga CTC ishte ngritur në 125/171 (73%) pacientë, niveli i AFP i të cilëve ishte <20 ng/mL me një ndjeshmëri prej 72.5% dhe një specifika prej 95,0%, krahasuar me 57,0% dhe 90,0% për AFP në një kufi prej 20 ng/mL.66 Kombinimi i AFP dhe CTC mund të përmirësojë zbulimin e HCC.45 Besohet se CTC kanë një avantazh ndaj AFP në shqyrtimin e hershëm të grupeve me rrezik të lartë për HCC.Megjithatë, zbulimi i kombinuar i CTC-ve i bazuar në shënues mund të rrisë përqindjen e rezultateve pozitive.54 Një përzierje e antitrupave anti-ASGPR dhe CPS1 arriti një shkallë zbulimi të CTC prej 91% në pacientët me HCC.63 Zhang et al.përdori një CTC-Chip me antitrupa kundër ASGPR, P-CK dhe CPS1, dhe gjithashtu dalloi pacientët me HCC nga ata me sëmundje beninje të mëlçisë ose jo-HCC në masën 100%.частота и количеството ЦОК со стадией TNM.65 Guo dhe соавторы обнаружили, что показатель ПЦР, полученный од ЦОК, был повышен во 125/171 (73%) pacientov, во которых чувствитель 7,2% dhe specifikiteti 95,0% për sravneniyu me 57,0% dhe 90,0% për AFP në lidhje me 20 ng/ml. grupп. frekuenca dhe numri i CTC-ve me stadin TNM.65 Guo et al zbuluan se PCR e përftuar nga CTC-të ishte e ngritur në 125/171 (73%) pacientë që kishin nivele AFP <20 ng/mL me një ndjeshmëri prej 72.5% dhe një specifikë prej 95.0% krahasuar me 57.0% dhe 90.0% për AFP në një nivel kufitar prej 20 ng/mL.66 Kombinimi i AFP dhe CTC mund të përmirësojë zbulimin e HCC.45 CTC konsiderohen të kenë një avantazh ndaj AFP në depistimin e hershëm grupe.me një rrezik të lartë të HCC.Megjithatë, zbulimi i kombinuar i bazuar në shënues të CTC-ve mund të rrisë përqindjen e rezultateve pozitive.54 Një përzierje e antitrupave anti-ASGPR dhe CPS1 arriti një shkallë të zbulimit të CTC prej 91% në pacientët me HCC.63 Zhang et al.përdori çipa CTC me antitrupa kundër ASGPR, P-CK dhe CPS1 dhe dalloi pacientët me HCC nga sëmundje beninje të mëlçisë dhe jo-HCC me 100%.64 Studimi i Wang identifikoi 60% të CTC-ve EpCAM+ në 42 pacientë me HCC dhe gjeti një korrelacion të rëndësishëm midis incidencës dhe numrit të CTC-ve në fazën TNM. 65 GUO 等 人 发现 ， 在 AFP 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 中 ， CTC 衍生 的 PCR 评分 升高 ， 敏感性 为 为 72.5%， 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 而 而 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 在 而 而 而 而 为 为 为 为值为20 ng/ml 时的特异性为57,0% 和90,0%. 65 Guo 等 人 发现 在 在 在 水平 <20 ng/ml 的 125/171 (73%) 名 患者 ， ， CTC 衍生 PCR 评分 敏感性 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 在 在 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止,截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止 截止值 为 20ng/ml 时 的 特异性 57.0% 和 90.0%。65 Guo et al.обнаружили, что во 125/171 (73%) pacientov me aurovnem AFP <20 ng/ml pokazatelit PCR, poluchennыe me pomoщьyu COK, bыli povыshenы me ndjeshmërinë 72,5% të ndjeshmërisë 72,5% të ndjeshmërisë në 95% отсечки Специфичность составляла 20 нг/мл. zbuloi se në 125/171 (73%) pacientë me nivele AFP <20 ng/mL, vlerat e PCR të rrjedhura nga CTC u ngritën me një ndjeshmëri prej 72.5% dhe një specifikë prej 95.0%, ndërsa AFP ishte në specifikën e ndërprerjes. ishte 20 ng/mL.ml ishte 57.0% dhe 90.0%.66 Kombinimi i ORP dhe CTC përmirëson zbulimin e HCC.45 CTC-të mendohet të jenë superiore ndaj AFP në shqyrtimin e hershëm të popullatave me HCC me rrezik të lartë.Kështu, për grupet CTC-pozitive dhe HCC me rrezik të lartë, testimi CTC duhet të kombinohet në mënyrë rutinore me zbulimin me ultratinguj dhe AFP.Megjithatë, CTC-të konsiderohen si parashikues të rëndësishëm të metastazës dhe përsëritjes së tumorit, dhe zbulimi i CTC-ve nuk rekomandohet në mënyrë të pavarur si një mjet diagnostikues.62 Prandaj, CTC mund të shërbejë si një biomarker parashikues më i mirë se shënuesit e tjerë të përdorur aktualisht. Zhou et al zbuluan se pacientët me numër të lartë të CTC-ve EpCAM+ dhe qelizave T rregullatore treguan një rrezik më të lartë të zhvillimit të përsëritjes së HCC, sesa ata me numër të ulët të CTC-ve, me një raport përsëritjeje prej 66.7% kundrejt 10.3% (P <0.001).67 Një studim i ngjashëm u raportua nga Zhong et al.68 Përveç kësaj, Qi zbuloi se 101 nga 112 pacientë (90,81%) me HCC, duke përfshirë ata me sëmundje të fazës së hershme, ishin pozitivë për CTC dhe se nyjet shumë të vogla të HCC u zbuluan pas 3 deri në 5 muaj ndjekje. Zhou et al zbuluan se pacientët me numër të lartë të CTC-ve EpCAM+ dhe qelizave T rregulluese treguan një rrezik më të lartë të zhvillimit të përsëritjes së HCC sesa ata me numër të ulët të CTC-ve, me një raport përsëritjeje prej 66.7% kundrejt 10.3% (P <0.001).67 A studim i ngjashëm u raportua nga Zhong et al.68 Përveç kësaj, Qi zbuloi se 101 nga 112 pacientë (90,81%) me HCC, duke përfshirë ata me sëmundje të fazës së hershme, ishin pozitivë për CTC dhe se nyjet shumë të vogla të HCC u zbuluan pas 3 deri në 5 muaj ndjekje. Çjou dhe dr.zhvlerësuar, çfarëdo në pacientov me shumë koliçesim COK EpCAM+ dhe rregullues kundër T-kletok rreziku i zvogëlimit të recidiva GCK ishte më i madh, sa i përket numrit më të ulët të sasisë prej 10% më të ulët (P60,7%) (p60,7% <10,7%). Zhou et al zbuluan se pacientët me CTC të ngritura EpCAM+ dhe qeliza T rregullatore kishin një rrezik më të lartë të përsëritjes së HCC sesa ata me CTC të ulëta, me një shkallë përsëritjeje prej 66.7% kundrejt 10.3% (P<0.001)67.Një studim i ngjashëm u krye nga Zhong et al.68. Përveç kësaj, Qi zbuloi se 101 nga 112 pacientë (90.81%) me HCC, duke përfshirë ata me sëmundje të hershme, kishin CTC dhe se nyjet shumë të vogla të HCC u zbuluan pas 3 deri në 5 muaj ndjekjeje. Zhou 等 人 发现 与 与 CTC 数量 较 少 的 患者 相比 ， EPCAM+ CTC 和 调节性 T 细胞 数量 升高 的 患者 发生 发生 复发 的 风险 更 ， 复发率 分别 为 为 为 66.7% 和 10.3% (P <0.001) Zhou 等 人 发现 与 与 CTC 数量 少 的 患者 相比 ， EPCAM+ CTC 和 T 细胞 数量 的 发生 发生 发生 发生 复发 复发 风险 复发率 分别 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 为 10.3% ( p <0.001) ........ Çjou dhe dr.обнаружили, что пациенты со повышенным количеством ЦОК EpCAM+ dhe rregullues i T-kletok emërli më shumë rreziku i rrezikut të recidiva ГЦК по сравнению со пациентами me pak koliçentami me pak me koliçentë me pak 1,7% 1,7% 1,6% 1,7% 1,0% 1,60% . Zhou et al.zbuloi se pacientët me CTC të ngritura EpCAM+ dhe qeliza T rregullatore kishin një rrezik më të lartë të përsëritjes së HCC krahasuar me pacientët me më pak CTC, me norma të përsëritjes përkatësisht 66.7% dhe 10.3% (P <0.001).Një studim i ngjashëm u raportua nga Zhong et al.68 Përveç kësaj, Qi zbuloi se 101 nga 112 pacientë me HCC (90.81%), përfshirë pacientët me sëmundje të hershme, kishin rezultate pozitive të CTC dhe gjetën nyje shumë të vogla HCC pas 3 vizitave.Vëzhgimi deri në 5 muaj.Ata gjetën gjithashtu CTC në 12 pacientë me infeksion kronik HBV dhe gjetën tumore të vogla HCC brenda 5 muajve në 2 pacientë CTC-pozitiv.69 Kështu, CTC-të mund të përdoren për të parashikuar HCC, 70 por ato mund të përdoren në mënyrë më rutinore si biomarkues parashikues.
Ashtu si cfDNA, cfRNA lëshohet në qarkullimin e gjakut përmes sistemeve të ndryshme.Këto molekula në gjakun periferik përfaqësojnë indin kanceroz të origjinës.Krahasuar me shënuesit e zbuluar me metoda jo-invazive, cfARN-të janë më të rregulluara në mënyrë dinamike, specifike për indet dhe të bollshme në mjedisin jashtëqelizor.Rëndësia dhe vlera diagnostike e 71 miRNA (miRNA) në HCC është raportuar në shumë studime.miARN-të janë ARN-të endogjene jo-koduese (ncARN) që rregullojnë aktivitete të ndryshme biologjike molekulare duke penguar përkthimin e ARN-ve të dërguara të synuara (mRNA).miRNA-të janë të vendosura në trupa apoptotikë të kapsuluar në ekzosome, por ato gjithashtu mund të lidhen në mënyrë të qëndrueshme me proteinat dhe lipidet e serumit në gjakun periferik dhe mund të përdoren për të vlerësuar HCC.microARN-të përfshihen në rigjenerimin e mëlçisë, metabolizmin e lipideve, apoptozën, inflamacionin dhe zhvillimin e HCC.72 MiRNA-të onkogjene si miR-21, miR-155 dhe miR-221 janë të njohura në HCC.Në veçanti, miR-21 luan një rol kyç në sintezën e kolagjenit në matricën jashtëqelizore dhe fibrozën dhe promovon hepatokarcinogjenezën duke aktivizuar qelizat burimore hematopoietike.72,73 miRNA-të e shtypjes së tumorit në HCC përfshijnë miRNA-122, miRNA-29, familjen Let-7 dhe familjen miRNA-15.Familja Let-7 përbëhet nga shumë miRNA shtypës të tumorit që synojnë familjen RAS.Familja miR-15 përfshin miR-15a, miR-15b, miR-16, miR-195 dhe miR-497, të cilat kanë sekuenca plotësuese për mRNA të caktuara.Përveç kësaj, ARN-të e gjata jo-koduese (lncARN) dhe ARN-të rrethore (cirRNA) janë gjithashtu të rëndësishme për shqyrtimin e hershëm të HCC.lncARN-të përfaqësojnë klasën më të gjerë të ncARN-ve, duke përfshirë ncARN-të të ngjashme me mRNA, dhe janë të përfshirë në patogjenezën e shumë sëmundjeve njerëzore.LncARN-të luajnë një rol rregullues në mikromjedisin e mëlçisë dhe sëmundjet kronike të mëlçisë.74 CircARN-të janë gjithashtu një klasë e ncARN-ve me funksione të shumëfishta në rregullimin e shprehjes së gjeneve.Kohët e fundit, circARN-të janë konsideruar si mjete diagnostikuese për HCC.
ARN e lirë qarkulluese ka një stabilitet të jashtëzakonshëm, duke përfshirë rezistencën ndaj temperaturës, pH dhe RNase, gjë që e bën më pak të lodhshëm izolimin e fnARN-së nga gjaku periferik duke përdorur metoda standarde të pastrimit të ARN-së.Metodat më të përdorura përfshijnë NGS, mikroarray dhe RT-qPCR.NGS lejon që mikroARN-të të maten në të gjithë gjenomin.Megjithatë, kjo metodë është e shtrenjtë dhe analiza nuk është e standardizuar.Në të kundërt, RT-qPCR është i lirë, amplifikon me shpejtësi acidet nukleike dhe ofron shumë përparësi, si ndjeshmëri më të lartë, saktësi më të lartë, gamë më të gjerë dinamike dhe nevojë për më pak mostra.Mikrovargjet janë një metodë tjetër e përdorur për zbulimin e miARN-së bazuar në hibridizimin e ndjeshëm dhe specifik të miRNA-ve të synuara me sonda plotësuese të ADN-së, 75 por analiza e të dhënave të mikrovargëve kërkon kohë.
MiR-122 dhe Let-7 qarkullues janë raportuar të jenë potencialisht të dobishëm në diagnostikimin e HCC në fazën e hershme në grupet me rrezik të lartë, shënuesit në pacientët me nodula premalinje të lidhura me HBV dhe HCC në fazën e hershme.76 Cai et al.zbuloi se anëtarët e familjes Let-7 (miR-92, miR-122, miR-125b, miR-143, miR-192, miR-16, miR-126 dhe miR-199a/b) janë në rrezik kronik HCC në pacientët me hepatit.Familja Let-7 mund të shërbejë si një biomarker zëvendësues efektiv për parashikimin e zhvillimit të HCC në grupet me rrezik të lartë të lidhur me hepatitin kronik C. 77 miR-122 ka saktësi të lartë diagnostike në zbulimin e hershëm të HCC në pacientët me cirrozë të mëlçisë.78 Serumi që qarkullon MiR-107 është vlerësuar gjithashtu në fazat e hershme të HCC, 79 dhe ka treguar potencial të mirë në popullatat me rrezik të lartë.Zhou et al raportuan se një panel miRNA-sh (miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a dhe miR-801) mund të dallojnë HCC nga hepatiti kronik B (CHB) dhe cirroza ndjeshmëria ishte përkatësisht 79.1% dhe 75%, dhe specifika 76.4% dhe 91.1%.80 Në HCC të lidhur me HBV, ne zbuluam se nivelet e miR150 ishin ulur ndjeshëm në krahasim me ato në pacientët kronikë të HBV pa HCC (ndjeshmëria 79.1%, specifika 76.5%).-224 u ngrit në HCC krahasuar me kontrollet e shëndetshme dhe analizat e nëngrupeve treguan nivele më të larta në pacientët me HCC të shoqëruar me HBV.Pacientët me cirrozë të lidhur me hepatitin B dhe HCC identifikuan një klasifikues siRNA që përmban shtatë siRNA të shprehura në mënyrë diferenciale që mund të zbulojnë HCC në kontrolle të ndryshme;Gama e AUC në shqyrtimin e hershëm është më e mirë se vullnetarët e AFP.Ata zbuluan se katër miRNA (miR-1972, miR-193a-5p, miR-214-3p dhe miR-365a-3p) mund të dallonin pacientët me HCC nga pacientët pa HCC.Pesë miRNA me mbishprehje (miR-122-5p, miR-125b-5p, miR-885-5p, miR-100-5p dhe miR-148a-3p) konsiderohen si infeksione të mundshme HBV në HCC, cirrozë dhe biomarkues CHB, veçanërisht miR-34a-5p mund të jetë biomarkues për cirrozën e mëlçisë,85 dhe mund të jetë biomarkues potencial për shqyrtimin e hershëm të HCC në popullatat me rrezik të lartë.LncARNi më i studiuar në HCC është shumë i aktivizuar në kancerin e mëlçisë (HULC).Studime të tjera kanë treguar se HULC që qarkullon në pacientët me HCC mund të përdoret si një shënues diagnostikues sepse kjo lncARN është shumë e rregulluar në pacientët me HCC në krahasim me individët e shëndetshëm.71,86 Ndër lnARN-të e tjera, LINC00152 konsiderohet lncARNi më i mirë diagnostik për shkak të AUC, ndjeshmërisë dhe specifikës së tij të lartë.86 Në një studim, shprehja e gjakut periferik të LINC00152 u rrit gradualisht nga kontrollet normale të shëndetshme te pacientët me CHB dhe cirrozë, dhe më në fund ishte më e larta në HCC.Studimet e shprehjes së circSMARCA5 në plazmën e pacientëve me HCC kanë treguar një rënie progresive të shprehjes në HCC duke filluar nga hepatiti në cirrozë dhe lezione prekanceroze.87 Analiza e kurbave ROC konfirmoi potencialin e këtyre circARN-ve në dallimin e pacientëve me hepatit ose cirrozë të mëlçisë nga ata me HCC, veçanërisht ata me nivele AFP nën 200 ng/mL.Për më tepër, Zhu analizoi 13,617 ARN ciklike në mostrat e plazmës nga pacientët HCC të lidhur me HBV dhe konfirmoi se 6 ARN ciklike u shprehën ndryshe në cirrozën e HCC dhe HBV, duke sugjeruar se cARN-të mund të jenë të dobishme.shënuesit për shqyrtimin e hershëm të grupeve me rrezik të lartë si ato që lidhen me sëmundjet e mëlçisë, pacientët me sklerozë.88
Ekzozomet janë vezikula membranore me diametër 40-160 nm;vezikula të shumta ndërqelizore bashkohen me membranën qelizore dhe lëshohen në matricën jashtëqelizore.Ato përmbajnë shumë përbërës aktivë, duke përfshirë lipide, proteina, ARN dhe ADN, dhe luajnë një rol kyç në komunikimin midis qelizave, si qelizat HCC ashtu edhe ato jo-HCC.89,90 Ekzozomet rregullojnë progresionin e HCC duke aktivizuar fibroblastet e hepatociteve dhe qelizat yjore, qelizat imune, hepatocitet normale dhe qelizat HCC.91 Në mikromjedisin e tumorit, qelizat tumorale prodhojnë një numër të madh ekzosomesh që barten nga qelizat e kancerit në qelizat e papjekura, të cilat nga ana e tyre janë të përfshira në onkogjenezën, degradimin dhe sinjalizimin qelizor.92 Studimet kanë treguar se ekzosomet mund të transferojnë onkogjene në qelizat normale gjatë proceseve patologjike, të cilat mund të jenë një nga mekanizmat e pushtimit të tumorit dhe metastazave.93 Roli i ekzosomeve në përparimin e kancerit mund të jetë dinamik dhe specifik për llojin e kancerit, 89 Ekzozomet mund të përvetësohen nga qelizat fqinje ose të largëta për të rregulluar gjenet e shumta të synuara në qelizat marrëse që mund të përfshihen në jonet e komunikimit ndërqelizor dhe ndërveprimet e mikromjedisit qelizor. ndërmjetësojnë sinjalizimin dhe metabolizmin qelizor.94 Karakteristikat dhe ndryshimet dinamike të molekulave të ngarkesave ekzosome pasqyrojnë drejtpërdrejt karakteristikat dhe ndryshimet dinamike të qelizave tumorale prindërore,95 e cila është gjithashtu baza për përdorimin e ekzosomeve në diagnostikimin dhe prognozën e kancerit, si dhe për parashikimin e përgjigjes individuale ndaj terapisë antikancerogjene. ..96
Metodat tradicionale laboratorike për izolimin dhe analizimin e ekzosomeve janë komplekse, me shumë hapa dhe kërkojnë kohë, duke përfshirë ultracentrifugimin, filtrimin, kromatografinë me përjashtim të madhësisë, pastrimin e imunoafinitetit, Western blotting, analizën imunosorbente të lidhur me enzimën (ELISA), analizën PCR dhe rrjedhën.Sistemet e miniaturës dhe platformat laboratorike në çip që përdorin mikro/nanoteknologji janë duke u zhvilluar gjerësisht për izolim të shpejtë dhe të përshtatshëm në vend të ekzosomeve.Analiza e gjurmimit të nanopartikulave (NTA) është një metodë e përdorur gjerësisht për karakterizimin e madhësisë dhe përqendrimit të ekzosomeve, duke përfshirë metoda të tilla si nanogrimcat magnetike dhe polihidroksialkanoatet.Metodat mikrofluidike dhe elektrokimike gjithashtu mund të zbulojnë me shpejtësi ekzosomet me rendiment të lartë.
Proteinat ekzosomale janë shënues të rëndësishëm për diagnozën e HCC.Në studimin Arbelaiz, niveli i proteinës lidhëse 98 RasGAP SH3 (G3BP) dhe receptorit të imunoglobulinës polimerike (PIGR) u ngrit ndjeshëm në ekzosomet me prejardhje nga HCC dhe efikasiteti i supozuar i kombinuar i dy proteinave ishte më i lartë se ai i AFP.Mbingarkesa me hekur është një faktor i rëndësishëm që kontribuon në zhvillimin e HCC.Tseng raportoi se hepcidina mund të luajë një rol kyç në rezistencën ndaj HCC.99 Ekzozomet e përftuara nga serumet e pacientëve me HCC kishin një numër dukshëm më të lartë të kopjeve të varianteve të mRNA të hepcidinës sesa homologët e tyre të shëndetshëm, duke sugjeruar që hepcidina mund të jetë një biomarker i ri diagnostikues për HCC.Proteina 14-3-3ζ në ekzosome të prodhuar nga 100 HCC mund të zvogëlojë aktivizimin, përhapjen dhe diferencimin e qelizave T dhe mund të nxisë transformimin e qelizave T në qeliza T rregullatore, duke rezultuar në varfërim të qelizave T.101 Kjo mbështetet nga disa studime që hetojnë evazionin e tumorit nga mbikëqyrja imune, 102 të cilat mund të kontribuojnë në tumorigjenezën e HCC.
Përveç pranisë së ecRNA-së në plazmë ose serum, ekzosomet e pasuruara me ARN mund të përdoren për stadifikimin në kohë reale jo-invazive në ekzaminimin e hershëm të tumorit dhe për të përcaktuar evolucionin e tumorit dhe përgjigjen ndaj terapisë.Niveli i miRNA-21 ekzosomike në serumin e gjakut në grupin HCC ishte 2.21 herë më i lartë se në grupin CHB dhe në grupin HCC ishte 5.57 herë më i lartë se në popullatën e shëndoshë.Në studimin Wang, ekzosomet rritën ndjeshëm HCC krahasuar me pacientët cirrotikë me vlera AUC prej 0,83 (95% CI 0,74-0,93) dhe 0,94 (95% CI 0,88-1,00).104 Të dhënat e marra sqaruan përfshirjen e molekulave specifike të ngarkesave ekzosomale në rregullimin e onkogjenezës dhe progresionit të HCC.105 Shprehja serike e miR-221, miR-103, miR-181c, miR-181a, miR-93 dhe miR-26a është e qëndrueshme.dhe metastaza, dhe nivelet e miR21 ishin shumë më të larta në pacientët me HCC sesa në kontrollet e shëndetshme dhe gjithashtu në pacientët me CHB.102 LncRNA kishte vlerë të mundshme diagnostikuese në HCC.Studimet kanë treguar se ekzosomet që rrjedhin nga serumet e pacientëve me HCC kanë nivele dukshëm më të larta të LINC00161, LINC000635 dhe lncARN të aktivizuar nga transformimi i faktorit të rritjes-β sesa te pacientët pa HCC, dhe këto lncARN janë të lidhura fort me fazën TNM dhe vëllimin e tumorit.110 Conigliaro et al.Ekzozomet CD90+ u zbuluan se shprehin nivele të larta të lncRNAH19, e cila rriti ndjeshëm lirimin e faktorit të rritjes endoteliale vaskulare (VEGF) dhe prodhimin e receptorit VEGF-R1, duke stimuluar kështu angiogjenezën.93 CircARN-të janë një lloj tjetër i ncARN-ve ekzosomale – të shprehura në nivele më të ulëta por të qëndrueshme në të gjithë speciet, circARN-të tregojnë gjithashtu specifikë për llojin e qelizës, llojin e indeve, fazën e zhvillimit dhe aktivitetin rregullator.111 circARN janë biomarkues diagnostikues për kancerin e hershëm dhe minimalisht invaziv.112 Provat klinike të fundit kanë treguar se specifika e miRNA-ve individuale në parashikimin e HCC nuk është ideale.Prandaj, zbulimi kompleks duke përdorur analiza të shumta (p.sh. miR-122 dhe miR-48a në kombinim me AFP) mund të përmirësojë identifikimin e HCC të hershëm dhe diferencimin e HCC nga cirroza.100
Pacientët me CHB dhe cirrozë të mëlçisë janë grupi më i zakonshëm me rrezik të lartë për zhvillimin e HCC.Për grupet me rrezik të lartë, pasi të arrihet një përgjigje e qëndrueshme virologjike, duhet të zhvillohet një strategji e mbikqyrjes me kosto efektive e bazuar në rrezikun e HCC dhe shqyrtimi i hershëm është çelësi për përmirësimin e diagnozës dhe trajtimit të HCC me një raport të lartë kosto-efektiviteti2 ..Metodat e hershme të shqyrtimit të kancerit kanë shumë kufizime: metodat efektive të shqyrtimit të hershëm nuk janë zhvilluar për shumicën e llojeve të kancerit dhe aderimi është zakonisht i ulët.Krahasuar me metodat tradicionale të shqyrtimit të hershëm, teknologjia e biopsisë së lëngshme ka avantazhe të dukshme: lehtësinë e marrjes së mostrave, zbulimin e panracit, riprodhueshmërinë e mirë të mostrës dhe përgjigjen efektive ndaj heterogjenitetit të tumorit.Duke pasur parasysh kosto-efektivitetin e metodave që lidhen me biopsinë e lëngshme, përdorimi i tyre në ekzaminimin HCC nuk është testuar në mënyrë rutinore.Pavarësisht përparimeve në zbulimin e saktë në nivel molekular, biopsia e lëngjeve është e kushtueshme për të zbuluar HCC në pacientët e synuar, duke kufizuar përdorimin e saj të përhapur në krahasim me procedurat specifike të imazherisë si ultratingulli dhe imazhet me rezonancë magnetike.113,114 Megjithatë, një studim i mëparshëm tregoi se biopsia e lëngshme tregoi një përfitim të rëndësishëm për sa i përket viteve të jetës së rregulluar me cilësi (QALYs).115 Janë treguar gjithashtu përfitimet e biopsisë së lëngshme në karcinomën e hershme të stomakut dhe nazofaringut.116,117 Pikëpamja aktuale është se biopsia e lëngshme mund të plotësojë biomarkerët e serumit dhe ekzaminimin radiologjik në zbulimin dhe diagnostikimin e tumoreve.117 118
Sipas literaturës aktuale, teknologjia e biopsisë së lëngjeve ka treguar ndjeshmëri dhe specifikë dukshëm më të lartë në shqyrtimin e hershëm të grupeve me rrezik të lartë për kancerin e mëlçisë.Pavarësisht nga lloji i biopsisë së lëngjeve, ajo mund të dallojë HCC nga individët me rrezik të lartë pa HCC, duke sugjeruar rëndësinë e shqyrtimit të hershëm pasi dallimet midis individëve me rrezik të lartë dhe atyre të shëndetshëm janë të dukshme.ctDNA ka një gjysmë jetë të shkurtër dhe mund të përdoret për të zbuluar HCC, kështu që çdo ndryshim në cDNA që rrjedh nga tumori mund të sigurojë prova konkrete në kohë reale të përparimit të tumorit, veçanërisht për tumoret e vogla.Një nivel i lartë i ctDNA tregon zhvillimin dhe përhapjen e kancerit dhe është një tregues i hershëm i progresionit dhe përsëritjes.Përveç kësaj, bazuar në rezultatet e ctDNA, pacientët mund të marrin trajtim dhe ndjekje të individualizuar.119 Vendet specifike të metilimit mund të jenë një shënues më i mirë se AFP për identifikimin e hershëm të HCC dhe nyjeve cirrotike.Në rastet e resektueshme të HCC, nivelet e larta të cDNA-së janë tregues i invazionit mikrovaskular dhe i përsëritjes dhe metastazave pas operacionit.Ndryshimet në numrin e kopjeve shoqërohen me mbijetesën e pacientëve me HCC.Mund të supozohet se vlerësimi i cDNA mund të përfshihet në trajtimin e përgjithshëm të HCC dhe cDNA mund të shërbejë si një tregues efektiv i modulimit terapeutik.Markuesit e bazuar në mutacione gjenetike specifike në ctDNA janë miratuar nga udhëzimet klinike për të parashikuar efikasitetin dhe për të monitoruar rezistencën ndaj ilaçeve.Testimi i ctDNA mund të jetë mjeti më i dobishëm i biopsisë së lëngshme për shqyrtimin e hershëm.CTC-të gjithashtu luajnë një rol kyç në shqyrtimin e hershëm të grupeve të HCC me rrezik të lartë.Markues të ndryshëm të CTC-ve të lidhura me HCC janë të një rëndësie të veçantë në fillimin, zhvillimin dhe përsëritjen e HCC.Si vezikula membranore, ekzosomet përfshihen në komunikimet ndërqelizore, veçanërisht në qelizat HCC.MikroARN-të qarkulluese janë të qëndrueshme në gjak dhe kështu mund të jenë më të dobishme për shqyrtimin e hershëm të HCC.Gradualisht, u zbuluan proteinat ekzosomale dhe ekzosome të pasura me ARN dhe u konfirmua efikasiteti i tyre parashikues për HCC.Është interesante se etiologji të ndryshme të HCC mund të shoqërohen gjithashtu me mutacione të ndryshme, kështu që ne mund të zgjedhim biomarkues të ndryshëm për shqyrtimin e hershëm bazuar në etiologji të ndryshme të HCC.120
Megjithatë, teknikat aktuale të biopsisë së lëngjeve janë të diskutueshme për sa i përket stabilitetit dhe nuk mund të kryejnë në mënyrë të pavarur shqyrtimin ose monitorimin e hershëm të HCC, por gjithsesi mund të plotësojnë shqyrtimin dhe diagnozën individuale.121 Si një formë e biopsisë së lëngshme, zbulimi dhe imazhi i ctDNA, CTC, cfRNA dhe AFP ose PIVKA-II e lidhur me ekzosome kanë aplikime premtuese në diagnostikimin dhe prognozën e hershme të HCC.Megjithatë, mekanizmi i saktë i lëshimit të ctDNA në gjak mbetet për t'u sqaruar.Zbulimi i vetive bazë biologjike të ctDNA mund të lehtësojë përdorimin e saj si shënues.Sasia e vogël e ctDNA në qarkullim dhe kërkesat strikte të trajtimit të mostrës janë sfida për zbatimin klinik të zbulimit të cDNA në HCC.Përveç kësaj, mutacionet gjenetike nuk kanë karakteristika specifike që lejojnë identifikimin e saktë të kancerogjenëve.Meqenëse variante të shumta gjenetike dhe somatike janë gjithashtu të pranishme në indet normale, mutacionet gjenetike të identifikuara nga biopsia e lëngjeve mund të jenë me dobi të kufizuar në shqyrtimin e hershëm për HCC.122 Kufizimet e objektivave dhe biomarkerëve të dobishëm të gjeneve të përcaktuara mirë që ndihmojnë në diferencimin e cDNA-së nga ADN-ja jo tumorale janë çështjet më të rëndësishme në përdorimin e cDNA.mungesa e dobisë së shënuesve të ndjeshëm dhe specifikë për zbulimin e CTC-ve.U gjetën vetëm qeliza të qëndrueshme me potencial metastatik dhe kombinimi optimal i shënuesve të pasuruar me CSC ishte i paqartë.Izolimi i CTC-ve për kulturën dhe vlerësimi i profileve të tyre mutacionale është gjithashtu një detyrë sfiduese.Për shkak të problemeve me identifikimin, izolimin dhe pastrimin e ekzosomeve, mekanizmi specifik molekular është ende i paqartë dhe studimet e mëparshme mbi mekanizmin e ekzosomeve dhe HCC nuk kanë qenë të thelluara, dhe mënyra se si miARN-të, lncARN-të dhe proteinat renditen në ekzosome , dhe nuk është e qartë nëse marrja e ekzosomeve është një proces i tipit specifik.Përdorimi i ekzosomeve për diagnostikimin dhe trajtimin e HCC është ende në fazën paraklinike.Mungesa e standardizimit të procedurave të biopsisë së lëngshme, si lloji i tubave që përdoren për të mbledhur gjak, vëllimi i gjakut, ruajtja dhe zbulimi i mostrës, izolimi dhe pasurimi, mund të përjashtojë përdorimin e tyre në praktikën rutinë klinike për shkak të dallimeve në praktikat në qendrat mjekësore.Efikasiteti i biopsisë së lëngshme në shqyrtimin e hershëm, diagnostikimin, vlerësimin e efikasitetit dhe parashikimin e HCC mbetet për t'u eksploruar, veçanërisht për grupet me rrezik të lartë.Teknologjia e biopsisë së lëngshme ka potencial të madh dhe pritet të përdoret gjerësisht në praktikën klinike të kancerit të mëlçisë në të ardhmen e afërt.
1. Sung H., Furley J., Siegel RL et al.Statistikat Globale të Kancerit 2020: GLOBOCAN vlerëson incidencën dhe vdekshmërinë nga 36 lloje të kancerit në 185 vende.CA Cancer J Clin.2021; 71 (3): 209-249.doi: 10.3322/caac.21660
2. Selia e Komisionit Kombëtar të Shëndetësisë.Kriteret për diagnostikimin dhe trajtimin e kancerit primar të mëlçisë (botimi 2022) [J].Journal of Clinical Liver Diseases, 2022, 38 (2): 288-303.doi: 10.3969/j.issn.1001-5256.2022.02.009
3. Zhou J, Sun H, Wang Z, etj.Udhëzime për diagnostikimin dhe trajtimin e karcinomës hepatocelulare (botimi 2019).Kanceri i mëlçisë.2020; 9 (6): 682-720.doi: 10.1159/000509424
4. Kokudo N, Takemura N, Hasegawa K, etj.Udhëzimet e praktikës klinike për karcinomën hepatocelulare: Shoqata Japoneze për Sëmundjet e Mëlçisë, 2017 (Udhëzimet e 4-të të JSH-HCC), përditësimi 2019.Rezervuari i sëmundjes së mëlçisë.2019; 49 (10): 1109–1113.doi:10.1111/hepr.13411
5. Barrera-Saldana HA, Fernandez-Garza LE, Barrera-Barrera SA Biopsia e lëngshme në sëmundjet kronike të mëlçisë.Ann Hepato.2021; 20:100197.doi:10.1016/j.aohep.2020.03.008
6. Tai TKYu., Tan P.Kh.Biopsia e lëngshme e kancerit të gjirit: një përmbledhje e fokusuar.Arch Pathol Lab Med.2021; 145 (6): 678-686.doi: 10.5858/arpa.2019-0559-RA
7. Kanval F., Singal AG Surveillance for hepatocellular carcinoma: praktikat më të mira aktuale dhe drejtimet e ardhshme.Gastroenterologjia.2019; 157 (1): 54-64.doi:10.1053/j.gastro.2019.02.049
8. European Research Association L, European Organization R, C Therapeutics.Udhëzimet klinike EASL-EORTC: trajtimi i karcinomës hepatocelulare.J Heparin.2012; 56 (4): 908-943.doi:10.1016/j.jhep.2011.12.001
9. Zhang G., Ha SA, Kim HK et al.Analiza e kombinuar e AFP dhe HCCR-1 si shënues serologjikë të dobishëm në karcinomën e vogël hepatocelulare: një studim i ardhshëm i grupit.Dis Mark.2012; 32 (4): 265-271.doi: 10.3233/DMA-2011-0878
10. Chen S, Chen H, Gao S, et al.Shprehja diferenciale e mikroRNA-125b plazmatike në sëmundjen e mëlçisë të lidhur me virusin e hepatitit B dhe potenciali diagnostik i karcinomës hepatocelulare të induktuar nga virusi i hepatitit B.Rezervuari i sëmundjes së mëlçisë.2017; 47 (4): 312-320.doi:10.1111/hepr.12739
11. Halle PR, Foster F., Kudo M. et al.Biologjia dhe rëndësia e alfa-fetoproteinës në karcinomën hepatoqelizore.Mëlçia int.2019; 39 (12): 2214–2229.doi: 10.1111/liv.14223
12. Omata M, Cheng AL, Kokudo N, etj.Udhëzimet klinike për trajtimin e karcinomës hepatoqelizore në rajonin e Azisë-Paqësorit: përditësimi 2017.Organizata Ndërkombëtare për Sëmundjet e Mëlçisë.2017; 11 (4): 317–370.doi: 10.1007/s12072-017-9799-9
13. Xu Fei, Zhang Li, He Wei etj.Vlera diagnostike e serumit PIVKA-II vetëm ose në kombinim me AFP në pacientët kinezë me karcinomë hepatocelulare.Dis Mark.2021; 2021: 8868370.doi: 10.1155/2021/8868370
14. Durin L., Praradines A., Basset S. et al.Biopsia e lëngut humoral jo plazmatik të kancerit të mushkërive me qeliza jo të vogla: më afër tumorit!qelizë.2020; 9 (11).doi: 10.3390/cells9112486
15. Mader S, Pantel K. Biopsia e lëngshme: statusi aktual dhe perspektivat e ardhshme.Trajtimi Oncol Res.2017; 40 (7-8): 404-408.doi: 10.1159/000478018
16. Palmirotta R, Lovero D, Cafforio P, etj.Biopsia e kancerit me bazë të lëngshme: një mjet diagnostikues multimodal në onkologjinë klinike.Adv Med Oncol.2018;10:1758835918794630.doi: 10.1177/1758835918794630
17. Mandel P., Metais P. Acidet nukleike në plazmën e njeriut.CR Seances Soc Biol Fil.1948; 142 (3-4): 241-243.
18. Mouliere F, Chandrananda D, Piskorz AM, etj.Zbulimi i avancuar i ADN-së së tumorit qarkullues nga analiza e madhësisë së fragmentit.Shkenca e përkthen mjekësinë.2018; 10:466.doi:10.1126/scitranslmed.aat4921
19. Underhill HR, Kitzman JO, Hellwig C. et al.Gjatësia e fragmentit të ADN-së së tumorit qarkullues.gjenet PLOS.2016; 12 (7): e1006162.doi:10.1371/journal.pgen.1006162
20. Cheng F, Su L, Qian C. ADN-ja e tumorit qarkullues: një biomarker premtues në biopsinë e kancerit me bazë të lëngshme.tumori i synuar.2016; 7 (30): 48832–48841.doi:10.18632/oncotarget.9453
21. Bettegovda S., Sauzen M., Leary RJ et al.Zbulimi i ADN-së së tumorit qarkullues në fazat e hershme dhe të vonshme të tumoreve malinje njerëzore.Shkenca e përkthen mjekësinë.2014; 6 (224): 224ra24.doi:10.1126/scitranslmed.3007094
22. Mehes G. Biopsi e lëngshme për analizën parashikuese mutacionale të kancerit të ngurtë: këndvështrimi i një patologu.J Bioteknologji.2019; 297:66-70.doi: 10.1016/j.jbiotec.2019.04.002
[PubMed] 23. Lenarts L, Tuveri S, Yatsenko T, et al.Zbulimi i hershëm i tumorit nga kontrolli i ADN-së plazmatike qarkulluese: reklamë apo shpresë?Ligji klinik belg.2020;75 (1): 9-1 doi: 10.1080/17843286.2019.1671653
24. Nishida N. Efekti i virusit të hepatitit dhe plakjes në metilimin e ADN-së në hepatokarcinogjenezën njerëzore.Histopatologjia.2010; 25 (5): 647-654.doi: 10.14670/HH-25.647